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ELISA檢測試劑盒實驗條件的選擇

釋出時間•₪↟✘: 2020-03-13  點選次數•₪↟✘: 1499次
   Elisa生物試驗是一種敏感性高₪₪,特異性強₪₪,重複性好的實驗診斷方法│││•·。由於其試劑穩定▩↟☁、易儲存₪₪,操作簡便₪₪,結果判斷較客觀等因素₪₪,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中│││•·。ELISA檢測試劑盒適用於體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測│││•·。
  在ELISA中₪₪,進行各項實驗條件的選擇是很重要的₪₪,其中包括:
  (1)包被抗體(或抗原)的選擇•₪↟✘:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時₪₪,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間│││•·。吸附溫度₪₪,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時│││•·。蛋白質包被的適濃度需進行滴定•₪↟✘:即用不同的蛋白質濃度(0.1▩↟☁、1.0和10μg/ml等)進行包被後₪₪,在其它試驗條件相同時₪₪,觀察陽性標本的OD值│││•·。選擇OD值大而蛋白量少的濃度│││•·。對於多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml│││•·。
  (2)固相載體的選擇•₪↟✘:許多物質可作為固相載體₪₪,如聚氯乙烯▩↟☁、聚苯乙烯▩↟☁、聚丙醯胺和纖維素等│││•·。其形式可以是凹孔平板▩↟☁、試管▩↟☁、珠粒等│││•·。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板│││•·。不管何種載體₪₪,在使用前均可進行篩選•₪↟✘:用等量抗原包被₪₪,在同一實驗條件下進行反應₪₪,觀察其顯色反應是否均一性₪₪,據此判明其吸附效能是否良好│││•·。
  (3)酶的底物及供氫體的選擇•₪↟✘:對供氫體的選擇要求是價廉▩↟☁、安全▩↟☁、有明顯地顯色反應₪₪,而本身無色│││•·。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用₪₪,應注意防護│││•·。有條件者應使用不致癌▩↟☁、靈敏度高的供氫體₪₪,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體│││•·。底物作用一段時間後₪₪,應加入強酸或強鹼以終止反應│││•·。通常底物作用時間₪₪,以10-30分鐘為宜│││•·。底物使用液必須新鮮配製₪₪,尤其是H2O2在臨用前加入│││•·。
  (4)酶標記抗體工作濃度的選擇•₪↟✘:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)│││•·。然後再固定其它條件或採取“方陣法”(包被物▩↟☁、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統裡準確地滴定其工作濃度│││•·。
  ELISA檢測試劑盒實驗禁忌•₪↟✘:
  1▩↟☁、濃洗滌液可能會有結晶析出₪₪,試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶₪₪,洗滌時不影響結果│││•·。
  2▩↟☁、本試劑不同批號組分不得混用│││•·。顯色劑B請避光儲存│││•·。
  3▩↟☁、如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔第1孔的OD值)₪₪,請先將樣本稀釋一定倍數(n倍)後再測定₪₪,計算時請zui後乘以稀釋倍數(×5×n)│││•·。
  4▩↟☁、封板膜只限一次性使用₪₪,以避免交叉汙染│││•·。
  5▩↟☁、嚴格按照說明書的操縱進行₪₪,試劑盒試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  6▩↟☁、從冷躲環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用₪₪,酶標包被板開封后如未用完₪₪,板條應裝進密封袋中儲存│││•·。
  7▩↟☁、所有樣品₪₪,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理│││•·。
  8▩↟☁、各步加樣均應使用加樣器₪₪,並經常校對其正確性₪₪,以避免試驗誤差│││•·。一次加樣時間控制在5分鐘內₪₪,如標本數目多₪₪,推薦使用排槍加樣│││•·。
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